测序新技术提供基因表达高精数据

最近，日本东京理科大学的一个研究小组开发了一种新的改进的单细胞RNA测序技术这种新方法，即终止子辅助的固体互补DNA扩增和测序，使用简单的材料和设备，提供比目前广泛使用的技术更准确的单细胞RNA测序数据研究人员表示，新技术结合了基因检测灵敏度，反应效率鲁棒性和细胞组成准确性的特点，使研究人员能够捕捉重要的细胞信息这项研究发表在第27期《通讯生物学》上

单细胞RNA测序的出现给医学和生物学领域带来了革命性的变化，它提供了一次研究数千个细胞内部工作的能力可是，单细胞RNA测序方法在确定细胞成分时具有潜在的不准确性和低效的cDNA扩增

新的TAS—序列技术使用一种不依赖模板的酶，称为末端转移酶，用于cDNA扩增但是TdT很难处理为了克服这一挑战，研究团队使用双脱氧核苷酸磷酸作为cDNA扩增反应的终止子，大大降低了TdT反应的技术难度

TAS—Seq还使用基于纳米孔的单细胞RNA测序平台，该平台允许分离组织样本中的单个细胞，从而减少细胞取样偏差，提高细胞成分数据的准确性。

研究小组随后验证了TAS—序列的效率，并将其与目前广泛使用的单细胞RNA测序技术10X铬V2和Smart—seq2进行了比较，其中使用了小鼠和人的肺组织样本他们发现，与主要的scRNA—seq平台相比，TAS—Seq不仅可以检测更多的完整基因，还可以识别更多高度可变的基因

我们发现TAS—Seq在基因检测灵敏度和基因丢失率方面可能优于10X铬V2和Smart—Seq2，这表明TAS—Seq可能是最敏感的高通量scRNA方法之一，领导该研究的助理教授Seiji Kono说我们可以更均匀地检测各种表达水平的基因，也可以更有力地检测生长因子和白细胞介素基因

新方法的另一个优点是TAS序列不易受批量效应的影响TAS—序列数据也与组织样品的流式细胞术数据高度相关，表明它可以产生高度准确的细胞组成数据

谈到未来，助理教授Seiji Kono透露:我们已经完成了TAS—SEQ2的开发，这是TAS—Seq2的改进和广泛优化版本在小鼠脾细胞中，Tas—seq2的基因检测灵敏度高1.5到2倍

单细胞RNA测序是医学和生物学研究的重要工具TAS—Seq和TAS—Seq2的开发将导致发现新的疾病治疗靶点，并在空间转录领域取得进展，这也取决于固相cDNA的合成它还将加快单细胞组学技术的发展，从而促进人们对生物学和疾病发生发展原理的理解